糖蛋白染色試劑盒

● 產(chǎn)品簡(jiǎn)介：                                                

本產(chǎn)品用于PAGE 凝膠或蛋白免疫印記硝酸纖維素膜上糖蛋白的檢測(cè)。整個(gè)染色2.5小時(shí)完成。染色后的糖蛋白為品紅色條帶，背景為淺粉色或者無(wú)色。該試劑盒檢測(cè)的靈敏度一般可以達(dá)到微克級(jí)別，但實(shí)際靈敏度跟靶蛋白糖基化程度相關(guān)，可以用于 SDS-PAGE 和2D電泳的凝膠檢測(cè)，也可以用于瓊脂糖凝膠電泳的檢測(cè)（但背景較高），還可以用于硝酸纖維素印跡膜的檢測(cè)。

按照每次使用25 ml糖蛋白染色試劑計(jì)算，本產(chǎn)品可以染色 8-10塊mini-PAGE（8×10cm）膠或印跡膜。

● 產(chǎn)品組成：

● 儲(chǔ)存條件

按照標(biāo)簽溫度貯存，常溫運(yùn)輸。開(kāi)封后一年有效。

●實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：

1. 配制 3%醋酸溶液：將 15 ml 自備的冰醋酸與 485 ml 超純水混勻，常溫保存?zhèn)溆谩?

2. 配制 50%甲醇溶液：將 250 ml 甲醇與 250 ml 超純水混勻，常溫保存?zhèn)溆谩?

3. 配制氧化試劑溶液： 將本試劑盒提供的氧化試劑干粉轉(zhuǎn)移到本試劑盒提供的250ml空塑料瓶中， 然后加入250 ml的超純水，充分混勻溶解后得到氧化試劑溶液，常溫保存?zhèn)溆谩?

4. 配制還原試劑溶液： 將本試劑盒提供的還原試劑干粉轉(zhuǎn)移到本試劑盒提供的 250ml 空塑料瓶中，然后加入 250 ml的超純水，充分混勻溶解后得到還原試劑溶液，常溫保存?zhèn)溆谩?

5. 配制1×SDS-PAGE上樣緩沖液：取0.4 ml 5×MonoClolor 蛋白上樣緩沖液，加入1.6 ml超純水，-20℃貯存?zhèn)溆谩?

6. 配制陽(yáng)性對(duì)照（辣根過(guò)氧化物酶）溶液：向裝有 1 mg 辣根過(guò)氧化物酶固體的棕色管中加入 1 ml 1×SDS-PAGE 上樣緩沖液，所得辣根過(guò)氧化物酶溶液的濃度即為 1mg/ml，然后適量分裝成8-10管， 留下一管當(dāng)天使用， 其余的放-20℃長(zhǎng)期保存。 對(duì)于 8×10 cm的凝膠來(lái)說(shuō)，每條泳道加 10 μl 的陽(yáng)性對(duì)照溶液即可，上樣前95℃處理5分鐘。

7. 配制陰性對(duì)照（大豆胰蛋白酶抑制劑）溶液：向裝有 1 mg 大豆胰蛋白酶抑制劑干粉的管中加入 1×SDS-PAGE 上樣緩沖液（自備），所得大豆胰蛋白酶抑制劑溶液的濃度即為 1 mg/ml，然后適量分裝成8-10管， 留下一管當(dāng)天使用，其余的放-20℃長(zhǎng)期保存。對(duì)于 8×10 cm的凝膠來(lái)說(shuō)，每條泳道加 10 μl 的陽(yáng)性對(duì)照溶液即可，上樣前95℃處理5分鐘。

8. 樣品稀釋：用 5×MonoClolor 蛋白上樣緩沖液將樣品濃度稀釋為 1 mg/ml，SDS-PAGE 上樣緩沖液終濃度為 1×。對(duì)于 8×10 cm的凝膠來(lái)說(shuō)，每條泳道加 5-10 μl 的樣品即可，上樣前95℃處理5分鐘。。

● 凝膠染色的操作步驟（膜染色從步驟3開(kāi)始）：

注意事項(xiàng)：

1.以下步驟僅針對(duì)0.75mm厚度大小8×10cm的凝膠，1-1.5mm厚度凝膠或更大體積凝膠適當(dāng)增加液體體積并延長(zhǎng)操作時(shí)間。

2. 請(qǐng)?jiān)谕L(fēng)櫥中進(jìn)行以下操作。

一. 固定：

取出電泳后的 SDS-PAGE 凝膠，在50 ml 50%甲醇溶液中，搖床慢搖30分鐘，棄甲醇溶液。

二. 漂洗：

50 ml超純水洗滌凝膠兩次，每次搖床慢搖10分鐘，棄超純水。

三. 氧化：

凝膠中加入 25 ml 氧化試劑，搖床慢搖15分鐘，棄溶液。

四. 漂洗：

50 ml超純水洗滌凝膠3次，每次搖床慢搖5分鐘，棄溶液。

五. 染色：

凝膠中加入25 ml糖蛋白染色試劑，搖床慢搖15 分鐘，糖蛋白會(huì)在5-10分鐘內(nèi)顯現(xiàn)品紅色。若檢測(cè)的糖蛋白含量較低，適當(dāng)延長(zhǎng)顯色時(shí)間。棄染色溶液。

注：若糖蛋白染色試劑中有晶體析出，只需取上清液即可，不要加熱溶解晶體。

染色步驟會(huì)產(chǎn)生有刺激性氣味氣體，請(qǐng)?jiān)谕L(fēng)櫥中操作。

六. 還原：

凝膠中加入 25 ml 還原試劑，搖床慢搖15分鐘，棄溶液。此時(shí)凝膠背景略帶紅色。

七. 漂洗：

加入50 ml 3%醋酸溶液搖床慢搖洗滌膠塊3次，每次10分鐘，直至膠背景紅色變淺，接近淡紅色或無(wú)色，此時(shí)紅色糖蛋白主帶清晰可見(jiàn)。

八. 保存：

膠塊保存在50 ml 3%醋酸溶液中。

● 實(shí)驗(yàn)記錄表格

實(shí)驗(yàn)日期：

實(shí)驗(yàn)示例：

蛋白轉(zhuǎn)到NC膜后糖蛋白染色

使用RTD6501 糖蛋白染色試劑盒發(fā)表部分文章列表（7篇）：

1. [IF=8.947] Adhesive property and mechanism of silkworm egg glue protein.

Author: Yutian Lei, Kaiyu Guo, Yan Zhang, Xiaolu Zhang, Lixia Qin, Xin Wang, Hongtao Zhu, Yuanyuan Guo, Wenxin Yang, Benchi Li Qingyou Xia, Ping Zhao, Zhaoming Dong

Journal: Acta Biomaterialia. Volume 134, 15 October 2021, Pages 499-512

Institution： Southwest University

Paper link：https://linkinghub.elsevier.com/retrieve/pii/S1742706121004773

2. [IF=8.2] Conjugation of dual-natural milk-derived proteins with fucoidan to preparecontrollable glycosylation products via dielectric barrier discharge cold plasma.

Author: Shuangshuang Wang, Yi Ding, Zhenquan Huo, Jiaming Li, Jiaqing Song, Weiwen Jian,Qinyi Gao, Minghui Zhang, Lili Zhao, Jing Zhang, Jiaying Zhang, Wupeng Ge.

Journal: International Journal of Biological Macromolecules. 255 (2024) 128035

Institution： Northwest A&F University

Paper link：https://doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2023.128035 

3. [IF=6.1] Inhibiting Protein Aggregation Using Cellulose Nanocrystal in MALDI-TOF MS Analysis: Improving the Sensitivity and Repeatability of Intact Protein in Pueraria.

Author: Shan L,Huang Y ,Zhang J ,Su Y,Guo Y.

Journal: Journal of Agricultural and Food Chemistry, 07 Dec 2023, 71(50):20146-20154

Institution：Shanghai Institute of Organic Chemistry, Chinese Academy of Sciences

Paper link：https://doi.org/10.1021/acs.jafc.3c04650

4. [IF=3.3] Similar construction of spicules and shell plates: Implications for the origin of chiton biomineralization.

Author: Haipeng Liu, Chuang Liu, Wenjing Zhang, Yang Yuan, Zhenglu Wang, Jingliang Huang

Journal: Journal of Proteomics 296 (2024) 105126

Institution：Hohai University，Sichuan University

Paper link：https://doi.org/10.1016/j.jprot.2024.105126  

5. [2023 IF=4.8] Regulatory effects of yam (Dioscorea opposita Thunb.) glycoprotein on energy metabolism in C2C12 and 3T3-L1 cells and on crosstalk between these two cells.

Author: Weiye Li, Jian Shi, Xueping Wu, Hongyong Qiu, Chunhong Liu

Journal: Journal of Ethnopharmacology 338 (2025) 119013

Institution：College of Food Science, South China Agricultural University

Paper link：https://doi.org/10.1016/j.jep.2024.119013

6. [2023 IF=4] Achieving thermostability of a phytase with resistance up to 100 ℃.

Author: Tao Tu, Qian Wang, Ruyue Dong, Xiaoqing Liu, Leena Penttinen, Nina Hakulinen, Jian Tian, Wei Zhang，Yaru Wang, Huiying Luo, Bin Yao, and Huoqing Huang

Journal: J. Biol. Chem. (2024) 300(12) 107992

Institution：State Key Laboratory of Animal Nutrition and Feeding, Institute of Animal Sciences

Paper link：https://doi.org/10.1016/j.jbc.2024.107992

7. [2023 IF=6.1 Neuronal CDK5RAP3 deficiency leads to encephalo-dysplasia via upregulation of N-glycosylases and glycogen deposition.

Author: Fanghui Chen, Minghui Xiang, Zhipeng Wang, Fan Yang, Junzhi Zhou, Zihan Deng, Susu Wang, Ping Li, Jieqi Tew, Wei Zhang,Honglin Li, Yong Teng, Xiaobin Zhu，Yafei Cai

Journal: Cell Death Discovery (2025)11:146

Institution：College of Animal Science and Technology, Nanjing Agricultural University,

Paper link：https://doi.org/10.1038/s41420-025-02414-y

PVDF膜糖蛋白染色：